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上海研域帶您了解ELISA試劑盒實驗詳細步驟
發(fā)布時間： 2023-07-18 點擊次數(shù)： 916次ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。
ELISA試劑盒包含預包被酶標板、檢測抗體、鏈酶親和素標記的HRP、標準品、標準品稀釋液、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測緩沖液等10個成分。
實驗前，請將試劑盒、樣本取出；室溫放置半小時，恢復至室溫。
第一步：ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液，至50ml離心管，吸取50ml20x洗液至1升量筒，加蒸餾水至1000毫升。
第二步：標準品溶解和稀釋
取出標準品，2000rpm 離心2分鐘，以便管壁上的粉末集中到管底，根據(jù)標簽，加入一定的蒸餾水，蓋上蓋子，渦旋震蕩5秒，靜置10-30分鐘至粉末溶解，準備8個1.5毫升的EP管，標注S1至S7和空白，用于標準品對策梯度稀釋；
加入150微升標準品稀釋液，吸取150微升重溶的標準品，至S1中進行2倍稀釋，吹打10次混勻，渦旋震蕩5秒，從S1管中吸取150微升液體，至S2管中，吹打混勻，繼續(xù)以上步驟梯度稀釋至S2至S7；
第三步：稀釋檢測抗體
檢測抗體為100x濃縮液，所以吸取50微升檢測抗體，至5毫升1x Assay Buffer 震蕩混勻備用；
第四步：加樣
取出已恢復至室溫的酶標板，加入300微升洗液，以洗去包被抗體保護劑，使包被抗體處于活性狀態(tài)，靜置浸泡30秒。洗板結束后，立即使用酶標板，不要讓酶標板干燥。
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